目的：构建pGEX-MLC2重组质粒，在大肠杆菌中表达并纯化谷胱甘肽硫转移酶（ GST ）-MLC2融合蛋白，以用于MLC2抗体的制备。方法：从人乳腺癌MCF-7细胞中提取总RNA，通过RT-PCR获得人MLC2 cDNA全长开放读码框架（open reading frame， ORF），并将其重组于原核蛋白表达质粒pGEX-6P-1中，经限制性内切酶和DNA测序鉴定，将该重组质粒转化大肠杆菌E．coli BL21，用异丙基β-D-硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达 GST-MIC2融合蛋白后，进行 Western blotting 分析，鉴定 GST-MLC2蛋白；通过 Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化融合蛋白，并用SDS-PAGE电泳鉴定该融合蛋白的纯度。结果：人乳腺癌MCF-7细胞MLC2的RT-PCR产物为535 bp，符合预期；重组质粒pGEX-MLC2经BamHI和EcoRI双酶切出现特征性的525 bp片段；DNA测序证实MLC2全长ORF序列正确无误。 IPTG诱导表达的GST-MLC2融合蛋白分子质量约为46.6 kDa，纯化后其蛋白纯度约95％，经Western blotting 分析表明诱导表达的蛋白是GST-MLC2融合蛋白。结论：人MLC2蛋白原核表达质粒的构建、GST-MLC2融合蛋白的表达和纯化，为MLC2抗体的制备及MLC2功能的深入研究奠定了基础。
作者：陈洋；何泽；张永臣；万青；赵虎子；赵蕾；沈传陆
来源：东南大学学报（医学版） 2013 年 4期
