目的 应用多重聚合酶链反应(MPCR)技术,建立铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌等常见致病菌的快速、高效鉴定方法,并用于气管切开患者气道分泌物和痰液标本检测.方法 根据铜绿假单胞菌oprL基因、金黄色葡萄球菌nuc基因和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因分别设计特异性引物,通过MPCR方法扩增上述病原菌的目的基因,同时优化MPCR反应体系,检测该方法的特异性、灵敏度和稳定性.收集气管切开患者的气道分泌物和痰液标本,分别采用传统微生物鉴定方法和MPCR法进行鉴定,记录鉴定结果和检测周期.结果 MPCR法在各引物比例条件下均可特异地扩增出3条目的片段,58℃为最佳退火温度,50ng· μL-1 DNA模板可被稀释至100倍,重复试验结果与上述结果一致.MPCR法与传统检测方法对临床标本的鉴定结果一致,但是前者相对于后者操作简单,耗时少.结论 这种基于MPCR的检测方法操作简单,特异性、灵敏度和稳定性高,检测周期短,成本低,能同时对多种病原菌进行检测,在鉴定气管切开术后的复合菌感染中具有较大优势.
作者：林茹；魏军；殷国民；董辉；李刚；贾伟；赵志军
来源：宁夏医科大学学报 2015 年 37卷 10期
