目的 构建转录因子增强子结合蛋白-2α的真核表达载体并进行鉴定,为TFAP2A的后续研究提供有效工具.方法 采用限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ对真核表达载体CV702 质粒进行酶切获得线性化载体;通过PCR扩增制备TFAP2A的cDNA片段,将线性化载体和TFAP2A的cDNA扩增产物进行体外环化连接,构建CV702-TFAP2A重组质粒.将连接产物进行细菌转化,挑取平板上的单克隆进行PCR鉴定,对阳性克隆进行测序及结果分析.将CV702-TFAP2A重组真核表达载体转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,通过Western blot检测TFAP2A的表达效率.结果 菌落PCR扩增和测序结果显示,CV702-TFAP2A重组真核表达载体构建成功;Western blot结果与Image J灰度值分析结果显示,与CV702 对照载体相比,转染CV702-TFAP2A重组质粒的MDA-MB-231 中的Flag-TFAP2A蛋白相对表达量更高(P<0.05).结论 成功构建CV702-TFAP2A的重组真核表达载体,证实转染CV702-TFAP2A的细胞中Flag-TFAP2A的表达水平升高.
作者：郭宇琪；王亚丽；张智源；高玉婧
来源：宁夏医科大学学报 2024 年 46卷 1期
