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目的 构建TAT?Apoptin的原核表达载体,表达并纯化凋亡素蛋白,检测其对多种肿瘤细胞的抑制作用.方法 利用PCR合成TAT?Apoptin序列,并将序列连接到pET?28b(+)原核表达载体的多克隆位点上,构建pET?28b?Apoptin载体,然后将重组载体转入E.coli BL21宿主菌,IPTG诱导表达,利用Ni?NTA亲和柱进行纯化获得目的蛋白.将TAT?Apoptin加入到肿瘤细胞中,用CCK8法检测TAT?Apoptin对肿瘤细胞的抑制作用.结果 成功构建pET?28b?Apoptin质粒,IPTG诱导宿主菌表达TAT?Apoptin,经SDS?PAGE分析,在15×103Mr处发现目的蛋白条带,与预期一致.镜检、CCK8法检测发现纯化的TAT?Apoptin对肿瘤细胞A549、MDA?MB?231、SKB?R3均具有一定的促凋亡作用.结论 TAT?Apoptin原核表达载体构建完成,表达的TAT?Apoptin对肿瘤细胞生长有促凋亡作用.
作者：周城波；刘安琪；杜晶春；徐霞
来源：热带医学杂志 2017 年 17卷 2期
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