在研发控制流浪犬卵透明带3(CZP3)免疫不育疫苗的过程中,需要制备特异性的CZP3抗血清进行免疫检测.本研究克隆获得CZP3的cDNA(全长1 281 bp)和除去跨膜区和信号肽的核心片段(CZP3c,984 bp),通过构建原核表达载体pET28a-CZP3c,转化大肠杆菌BL21(DE3).在28℃下以0.6 mmol·L-1异丙基硫代β-D-半乳糖苷诱导表达4h,获得CZP3C融合蛋白.利用CZP3C融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备特异性的抗血清,并对抗血清的特异性和效价进行评价.SDS-PAGE结果表明,融合蛋白以包涵体形式存在.经过镍柱亲和纯化及8 mmol·L-1尿素复性后,获得了高纯度的CZP3C融合蛋白.用0.80μg·μL-1的CZP3C融合蛋白免疫新西兰大白兔,免疫后的兔抗血清用Western blot及间接免疫荧光实验检测,结果证明CZP3C兔抗血清具有较高的特异性,ELISA检测效价为1∶409600.本研究所制备的抗血清能够为流浪犬免疫不育疫苗的研制提供检测材料.
作者：张贝贝；王颖；张冀；张富春
来源：四川动物 2016 年 35卷 5期
