目的 构建携带NT4-SAC-HA2-TAT融合基因的重组腺相关病毒载体,并感染前列腺癌鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)移植瘤,观察目的基因前列腺凋亡反应基因-4(par-4)选择性癌细胞凋亡结构域(SAC)的表达及其对CAM移植瘤的生长抑制作用.方法 利用磷酸钙共沉淀法将包装质粒pAAV/Ad、腺病毒辅助质粒pFG140及重组穿梭质粒pSSCMV/NT4 -SAC-HA2 -TAT共转染293细胞,制备重组腺相关病毒(rAAV),斑点杂交法检测病毒滴度.取孵育9d龄健康鸡胚,CAM接种前列腺癌细胞系PC-3细胞,建立前列腺癌的CAM移植瘤模型,接种3d后挑选成瘤鸡胚随机分为3组:空白对照组(PBS),空病毒组(AAV)和重组病毒组(rAAV),观察瘤体生长情况,上述处理4d后测量比较不同组移植瘤体积,并切片染色病理检查.免疫荧光法检测移植瘤中SAC融合肽的表达.结果 酶切鉴定结果证实成功构建pSSCMV/NT4 -SAC-HA2-TAT,斑点杂交法检测重组病毒滴度约为3.34 × 1010 ～3.34×1011 cfu/mL.免疫荧光法证实SAC融合肽表达.移植瘤能在CAM上生长,可见瘤周围丰富毛细血管汇集,rAAV组瘤体显著缩小,病理HE染色可见瘤细胞局限及侵袭抑制.结论 成功构建SAC重组腺相关病毒载体并感染前列腺癌CAM移植瘤,重组病毒表达分泌的SAC融合肽对前列腺癌CAM移植瘤具有诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭性增殖等作用
作者：于张健；张士宝；刘庆勇；阮喜云；杨广笑；王全颖
来源：山东大学学报（医学版） 2012 年 50卷 7期
