目的 观察利用小干扰RNA(siRNA)抑制Caspase-3表达对内毒素诱导肝细胞凋亡的影响.方法 针对Caspase-3的DNA序列843～1 634 bp设计引物,常规分子克隆至慢病毒表达载体pLenti-7.1,同时设置空载体为阴性对照;利用Lipofectamine 2000转染至293T细胞,48 h后收获抑制Caspase-3表达病毒质粒V-Caspase-3和空载体病毒质粒V-control.将肝细胞HL7702随机分为观察组和对照组,分别加入V-Caspase-3、V-control培养4 h,均与终浓度为20 mg/L的内毒素共培养12 h.采用Western blotting 法检测Caspase-3蛋白,流式细胞术测算细胞凋亡率,原位末端标记技术测算细胞凋亡指数(AI),MTT法观察细胞增殖活力.结果 观察组HL7702细胞Caspase-3相对表量为17.32±2.16,低于对照组的62.14±4.36(P<0.01);观察组HL7702细胞凋亡率为28.75％,低于对照组的72.67％(P<0.01);观察组HL7702细胞AI为23.52±1.24,低于对照组的54.26±1.87(P<0.01);观察组HL7702细胞增殖率为65.47％±6.24％,高于对照组的41.39％±4.87％(P<0.01).结论 通过siRNA抑制Caspase-3表达能有效降低内毒素诱导的HL7702细胞凋亡,从而增强细胞增殖活性.
作者：王雪银；宋献美；马云云
来源：山东医药 2017 年 57卷 34期
