目的·探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ1(peroxisome proliferator activated receptorγ1,PPARγ1)的SUMO化修饰在白介素4(interleukin-4,IL-4)诱导巨噬细胞M2极化过程中的作用和机制.方法· 在HEK293T细胞中共转染FLAG-PPARγ1-WT/突变体质粒、HA-SUMO1质粒,使用标签FLAG及HA的抗体分别进行免疫共沉淀后进行蛋白质印迹分析,确认PPARγ1的SUMO化修饰和修饰位点.过表达FLAG-PPARγ1-WT、HA-SUMO1及野生型RGS-SENP1以及去SUMO化修饰酶活缺失的突变体RGS-SENP1mut,证明SENP1是PPARγ1的去SUMO化修饰酶.用IL-4刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7和体外分离的原代小鼠腹腔巨噬细胞,使其向M2型活化,使用PPARγ及SUMO1的抗体进行免疫共沉淀,明确内源性PPARγ1的SUMO化修饰在M2极化过程中的变化.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-4刺激后的PPARγ1野生型及突变型稳转细胞系RAW264.7中M2相关基因的mRNA水平.用染色质免疫共沉淀实验比较PPARγ1 WT及突变体结合于精氨酸酶Ⅰ(arginaseⅠ,Arg1)启动子的能力.结果 ·PPARγ1蛋白第77位赖氨酸(K77R)能被SUMO化修饰,并能被SENP1去SUMO化.在IL-4诱导巨噬细胞M2型极化时,PPARγ1的SUMO化水平降低.稳定表达SUMO化位点突变体PPARγ1-K77R的RAW264.7细胞,Arg1 mRNA水平升高;PPA

作者：王秀芝；左勇

来源：上海交通大学学报（医学版） 2019 年 39卷 12期