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嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶和溶血素是该菌重要的致病因子与保护性抗原.致病性嗜水气单胞菌TPS-30株为江浙一带鱼类暴发病病原主要血清型0:9的代表株.研究利用PCR方法扩增嗜水气单胞菌TPS-30株的丝氨酸蛋向酶基因(Spe)和溶血素基因(Hly),将基因Spe和Hly通过柔性片段进行融合,并将融合片段插入pET32a的多克隆位点,构建成重组融合表达载体pET32a-Spe-Hly.将重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙醛-β-D-硫代半乳精苷(IPTG)诱导表达,获得融合蛋向Spe-Hly.表达产物经SDS-PAGE检测,显示与预期大小约130 kD相吻合的融合蛋白带.纯化融合蛋白并对鲫鱼进行免疫攻毒试验.结果表明,丝氨酸蛋白酶基因和溶血素基因融合表达载体构建成功,并成功获得了融合蛋白Spe-Hly,对鲫鱼的免疫保护率达81.4％.这为基因工程亚单位多价疫苗的开发提供基础.
作者：潘晓艺；郝贵杰；姚嘉赟；徐洋；尹文林；沈锦玉
来源：水生生物学报 2010 年 34卷 3期
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