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目的为研制预防结核病疫苗,选取结核杆菌HSP65蛋白为免疫抗原,将结核分枝杆菌HSP65抗原基因在大肠杆菌中表达、纯化.方法将HSP65的全长cDNA插入到原核表达载体pGEX5T中,构建成pGEX5T-HSP65重组质粒.将质粒转化到E.coli.K802细菌,用IPTG诱导HSP65表达,然后用亲和层析的方法进行纯化,最后用Western-blot方法确认表达蛋白的特异性.结果获得了pGEX5T-HSP65重组子,HSP65蛋白在k802菌中获得了表达,表达的蛋白条带大小约86kDa,与预期的结果相符.表达产物经亲和层析后获得了较单一的蛋白条带;表达及纯化的蛋白在纯化前后均可被结核病患者血清特异地识别.为进一步研究其在结核病诊断和防治中的应用打下了基础.
作者：王庆敏；胡振林；肖存杰；章建程；孙树汉
来源：中国生物工程杂志 2004 年 24卷 4期
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