目的:探讨呼吸道黏蛋白(mucin,MUC)5AC基因5'上游序列顺式调控元件在中性粒细胞弹力酶(neutrophil elastase,NE)诱导MUC5AC基因转录表达的调控机制.方法:应用DNA重组技术,构建含萤光素酶报告基因和MUC5AC启动子不同长度片段的嵌合质粒.采用定点突变技术,在嵌合质粒的基础上构建MUC5AC启动子区特殊蛋白(specificity protein)-1和核因子(nuclear factor,NF)-κB结合位点单独突变体,并测定NE刺激的转染细胞荧光素酶相对活性.结果:成功构建了4种含有不同长度MUC5AC基因启动子序列的荧光素酶报告基因质粒.含有启动子序列-1330bp、-689bp、-324bp的嵌合质粒荧光素酶相对光强度较对照组均显著增加,而含有启动子序列-64bp的嵌合质粒荧光素酶相对光强度与对照组相比差异无统计学意义.NE可诱导含有MUC5AC启动子区NF-κB结合位点单独突变体(pGL3E-MUC5AC-NF-κB-MU)荧光素酶相对光强度增加,而NE不能诱导Sp-1结合位点单独突变体(pGL3E-MUC5AC-SP-1-MU)荧光素酶表达增加.结论:MUC5AC 5'上游序列中-324～-64位点存在参与NE诱导MUC5AC基因表达的重要调控元件,位于此区域的顺式作用元件Sp-1位点在NE诱导MUC5AC基因表达机制中起重要作用,该位点可能作为靶向性基因治疗的关键调控元件.
作者：李升锦；周向东
来源：中国生物工程杂志 2007 年 27卷 2期
