目的:探讨运用增强子上调肿瘤特异性启动子hTERT转录活性后,调控自杀融合基因CDTK对人肝癌细胞系Bel-7402的体内外杀伤作用.方法:将CMV增强子、hTERT启动子及CDTK自杀融合基因克隆入核糖体基因区打靶载体pHrn,构建pHr-CeTpCDTK-GFP治疗载体并转染Bel-7402细胞,经RT-PCR、HPLC、MTT检测CDTK基因的表达和对肝癌细胞的体外杀伤效果.再将Bel-7402细胞接种到裸鼠皮下致瘤,以肿瘤杀伤载体pHr-CeTpCDTK-GFP进行瘤内转染并检测其抑瘤效果,此外将转染后的细胞接种致瘤,检测其成瘤时间及肿瘤生长曲线等,从两方面检测其体内杀伤效果.结果:成功构建了肿瘤特异性治疗载体,体外转染肝癌细胞后,经RT-PCR、HPLC证明CDTK基因能在肝癌中表达,且治疗载体在体外对肝癌细胞有明显毒性.动物实验结果发现裸鼠致瘤后治疗组血清中5-Fu浓度为7.694μg/ml,治疗组肿瘤体积与对照组相比减小6.5倍.而细胞转染治疗载体后致瘤,治疗组成瘤时间比对照组晚8天,且治疗组裸鼠的平均生存期较对照组延长16天.结论:pHr-CeTpCDTK-GFP载体能在体内外高效靶向杀伤肝癌细胞,为肝癌基因治疗提供了一种新的途径.
作者：薛金锋；薛志刚；陈毅瑶；李卓；尹彪；邬玲仟；梁德生
来源：中国生物工程杂志 2015 年 35卷 6期
