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人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)是一种能够调节核糖核酸酶活性的酸性包浆蛋白.通过构建含SUMO、IF2、GST、NusA、MsyB、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌进行自诱导(auto-induction,AI)表达,从而使hRI的表达量得以提升.利用MagNi磁珠纯化及电泳分析hRI的表达状况,通过RNase/Sepharose亲和层析获得纯度较高的蛋白.纯化后获得的融合蛋白浓度为2 960.513mg/L,与其它公司的hRI活性进行比较,检测其酶活性约为50U/μl,并使其成功用于RNA的保护,为NusA-hRI的应用提供理论依据.

作者:付大伟;孙莹莹;徐伟

来源:中国生物工程杂志 2019 年 39卷 3期

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作者:
付大伟;孙莹莹;徐伟
来源:
中国生物工程杂志 2019 年 39卷 3期
标签:
人核糖核酸酶抑制因子 融合标签 诱导表达 磁珠纯化 亲和层析
人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)是一种能够调节核糖核酸酶活性的酸性包浆蛋白.通过构建含SUMO、IF2、GST、NusA、MsyB、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌进行自诱导(auto-induction,AI)表达,从而使hRI的表达量得以提升.利用MagNi磁珠纯化及电泳分析hRI的表达状况,通过RNase/Sepharose亲和层析获得纯度较高的蛋白.纯化后获得的融合蛋白浓度为2 960.513mg/L,与其它公司的hRI活性进行比较,检测其酶活性约为50U/μl,并使其成功用于RNA的保护,为NusA-hRI的应用提供理论依据.

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