为了制备禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) gp90蛋白的单克隆抗体,应用His-gp90融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,经过筛选、3次亚克隆后获得3株稳定分泌抗REV-gp90蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为3G5-B8、3G5-A10和1G12.经间接ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)方法检测,单克隆抗体的亲和力解离常数(Kd)分别为6.483×10-10、4.844× 10-10和9.330×10-10,3株单抗的亚型分别为IgGl,IgG1和IgG2b.经Western blotting和间接免疫荧光实验检测,3株单抗均能识别REV感染DF-1细胞后产生的gp90蛋白.以Western blotting方法利用单抗检测不同截短的gp90蛋白,初步确定3G5-B8和3G5-A102株单抗抗原识别区均位于gp90蛋白第200-245位氨基酸,而1G12株单抗识别区包含第230-235位氨基酸.这些单抗为REV的诊断和致病机理研究奠定了基础.
作者：孙明铭；李晓齐；曹红；王永强；郑世军
来源：生物工程学报 2015 年 31卷 1期
