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目的:克隆、表达并纯化大肠杆菌M15碱性磷酸酶(EAP)成熟肽(phoA),分析其活性.方法:采用PCR技术从M15基因组DNA中扩增出phoA编码基因；构建其原核表达载体pCold-TF-EAP;转入E.coli BL21(DE3)进行表达；IMAC Ni-NTA柱层析法纯化重组蛋白；重组蛋白与底物对硝基苯磷酸二钠显色反应分析其活性.结果:克隆得到了序列约1 400bp phoA编码基因,原核表达了分子量约为100 kDa的融合重组EAP(rEAP),纯化获得的rEAP具有催化磷酸单酯的活性,有效反应温度范围大,在27℃～67℃都具有较高的催化活性,在pH7.5 ～8.0间催化活性最高.结论:克隆了可正确表达EAP的phoA编码基因,为EAP的工业化生产及应用提供了生物材料.
作者：杜庆辉；贺丽；刘双喜；张莉君；冒艳丽；朱小平；焦红梅；李国才
来源：生物技术 2012 年 22卷 6期
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