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构建靶向乙肝病毒(HBV)X基因的真核表达载体pSOS-X-siRNA和pSOS-siRNA,转染肝癌细胞系HepG2和 HepG2.2.15,筛选和验证高效siRNA.设计4个靶向X基因siRNA,将siRNA和HBx基因插入载体pSOS得重组质粒pSOS-X-siRNA;pSOS-X-siRNA经Pac I酶切去除目的片段HBx后得pSOS-siRNA.将质粒pSOS-X-siRNA和pSOS-siRNA分别转HepG2和HepG2.2.15肝癌细胞株.荧光显微镜下观察HepG2细胞绿色荧光(GFP)减弱程度预估干扰效率.ELISA 检测HepG2.2.15细胞上清HBsAg、HBeAg表达,Western blotting检测胞内蛋白HBsAg、HBcAg表达,Real time PCR检测胞内HBs mRNA、HBx mRNA的转录.转染4 d后,siRNA4使HepG2细胞的GFP信号表达程度最低,为阴性对照的9
作者：韦德芳；高健；曾春华；彭明利；任红
来源：生物技术通报 2010 年 11期
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