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近来CRISPR/Cas9系统作为一种成熟的基因编辑工具,被广泛应用.然而由于长链非编码RNA特殊的结构,该系统针对其研究的报道并不多见.选取与肿瘤生成、发展密切相关的长链非编码RNA HOTAIR为研究对象,通过构建Cas9核酸酶稳定遗传表达细胞株,建立pgRNA文库,对其进行基因敲除.qRT-PCR结果显示,pgRNA/Cas9系统靶向HOTAIR基因可使其表达下调60％.MTT增殖检测及细胞划痕实验结果表明:此系统介导的HOTAIR下调可明显抑制HeLa细胞的增殖与迁移.同时,肿瘤抑制因子p21、p53、pRB和DLC1转录水平的变化也暗示,HOTAIR对细胞功能的影响与其调控相关肿瘤抑制因子之间存在紧密联系.因此,利用Cas9技术抑制HOTAIR的表达对全面了解其功能具有重要意义.
作者：刘宏博；郑鹏；印泽；张同存
来源：生物技术通报 2017 年 33卷 11期
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