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目的:建立特异、灵敏、快速的TaqMam实时荧光定量PCR方法,用于烟草环斑病毒(TRSV)的定量检测.方法:用纳米磁珠法提取病毒RNA,构建包含烟草环斑病毒全CP序列的质粒标准品.根据CP保守序列设计特异性的引物和TaqMam荧光探针,构建标准曲线,建立TILSV的实时荧光绝对定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估.结果:建立的方法特异性好,与南芥菜花叶病毒、马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒均无交叉反应;至少能检测到767个病毒拷贝,灵敏度比普通PCR高100倍;同一样品试验内及试验间重复性实验的变异系数均小于3

作者:刘梅;黄新;马占鸿;陈洪俊;李明福

来源:生物技术通讯 2010 年 21卷 1期

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作者:
刘梅;黄新;马占鸿;陈洪俊;李明福
来源:
生物技术通讯 2010 年 21卷 1期
标签:
烟草环斑病毒 实时荧光定量PCR TaqMan探针
目的:建立特异、灵敏、快速的TaqMam实时荧光定量PCR方法,用于烟草环斑病毒(TRSV)的定量检测.方法:用纳米磁珠法提取病毒RNA,构建包含烟草环斑病毒全CP序列的质粒标准品.根据CP保守序列设计特异性的引物和TaqMam荧光探针,构建标准曲线,建立TILSV的实时荧光绝对定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估.结果:建立的方法特异性好,与南芥菜花叶病毒、马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒均无交叉反应;至少能检测到767个病毒拷贝,灵敏度比普通PCR高100倍;同一样品试验内及试验间重复性实验的变异系数均小于3

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