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目的：构建人自噬相关基因LC3B的真核表达载体pEGFP-C1-LC3B，并鉴定其表达。方法：以乳腺文库为模板，PCR扩增LC3B全长基因，将其克隆至pEGFP-C1表达载体，得到pEGFP-C1-LC3B重组质粒，酶切和测序鉴定后，转染ZR75-1细胞，Western印迹检测真核细胞中GFP-LC3B融合蛋白的表达，用倒置荧光显微镜观察自噬诱导剂雷帕霉素处理和未处理ZR75-1细胞质中GFP-LC3B的分布。结果：Western印迹可见GFP-LC3B融合蛋白表达条带；在荧光显微镜下，ZR75-1细胞内可见绿色荧光，雷帕霉素刺激后有明显绿色荧光聚集体形成。结论：人自噬相关基因LC3B的真核表达载体pEGFP-C1-LC3B构建成功，为进一步研究自噬在乳腺癌细胞中的作用机制奠定了基础。
作者：朱杰；丁丽华；刘婕；禾荣华；张亚楠；陈志达；罗晓丽；叶棋浓；吕朝晖
来源：生物技术通讯 2015 年 4期
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