木聚糖酶是降解半纤维素最主要的酶，对于开发可再生生物能源具有重要的应用价值。分别以东方肉座菌（ Hypocrea orientalis） EU7－22的基因组DNA和cDNA为模板，利用染色体步移和PCR技术首次克隆获得该菌GH10家族木聚糖酶Ⅲ的基因（ xynⅢ），并对其进行生物信息学分析。结果表明：该基因全长1283 bp （ gxynⅢ），含有3个内含子；CDS序列为1044 bp（ cxynⅢ），编码347个氨基酸，N端含有一个16 aa的信号肽序列；XYNⅢ氨基酸序列与Trichoderma pseudokoningii的endoxylanase具有较高的同源性。经生物信息学分析，XYNⅢ成熟蛋白可能含有18个N－糖基化位点，其理论等电点（pI）为6．14，蛋白质分子质量为36．55 ku，属于亲水性蛋白；SWISS－Model 建模预测，XYNⅢ成熟蛋白中含有11个α螺旋，其核心结构为8个β折叠片围成一个柱状结构。同时将编码成熟蛋白的基因片段mxynⅢ与pPIC9K质粒连接构建表达载体后转化毕赤酵母，对重组子表达产物进行酶活检测显示该基因能在毕赤酵母中表达有生物活性的XYNⅢ并分泌到胞外，发酵液中的木聚糖酶活在诱导培养168 h后可达到127．5 IU／mL。
作者：吴金连；薛勇；黎海龙；刘健；甘礼惠；龙敏南
来源：生物学杂志 2015 年 5期
