目的：构建含有HSV1-tk（ Herpes simplex virus type 1 thymidine kinase， HSV1-tk）基因的真核表达载体，并检测其在人肺腺癌AGZY细胞系中的表达。方法应用PCR反应从质粒pHSV106质粒中扩增HSV1-tk基因后与pMD18-T载体连接，构建重组质粒pHSV1-tk/18T。将测序正确的重组质粒插入plRES2-EGFP 载体内，通过LipofectamineTM 2000将表达载体转染人肺腺癌AGZY细胞。结果酶切鉴定结果表明扩增的HSV1-tk基因序列正确；用荧光显微镜观察HSV1-tk基因的转入和表达；RT-PCR和Western blot结果显示在AGZY细胞中HSV1-tk基因在转录水平和蛋白水平均可以正确表达。MTT结果显示转染后AGZY细胞与未转染细胞在细胞增殖能力方面无明显差别。结论成功构建HSV1-tk报告基因的真核表达载体，在人肺腺癌AGZY细胞中能有效表达。
作者：栾厦；付鹏；金钟男；田国梅；姜廷军；曹学良；赵长久
来源：实用肿瘤学杂志 2014 年 2期
