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目的:设计并构建针对胰腺癌基因治疗中最关键的靶基因人细胞核因子κB( human NF- κB)的miRNA干扰载体.方法:根据靶基因设计并合成miRNA oligo(引物设计软件),将oligo退火成双链,然后用载体构建试剂盒进行重组克隆,将双链的miRNA oligo插入到miRNA表达载体中,构建miRNA质粒,转化入感受态细胞DH5α,从转化平板分别挑取克隆,用载体通用引物进行菌落PCR筛选,筛选得到的阳性克隆进行测序,以验证重组克隆中插入片段序列是否与设计的oligo序列一致.结果:经过比对,重组克隆中插入片段序列与设计的oligo序列完全一致.结论:成功构建了针对靶基因human NF-κB的miRNA干扰载体,为进一步研究奠定了基础.
作者：张春勇；朱海涛；谢敏
来源：现代医学 2012 年 40卷 4期
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