目的:利用慢病毒包装系统使人眼小梁网细胞(HTMCs)稳定表达HES1 shRNA并初步探索HES1在HTMCs的作用.方法:体外培养HTMCs和HEK293FT细胞并进行传代,同时应用pLKO.1-puro shRNA慢病毒载体构建HES1 shRNA质粒.Lipofectamine 2000慢病毒包装法感染原代HTMCs,使其稳定表达HES1 shRNA/Scramble质粒.采用q-PCR和Western blot方法检测HES1shRNA的敲低效果及促纤维化细胞外基质蛋白(ECM)的表达变化;HTMCs增殖和迁移能力分别通过CCK-8细胞活性分析和Transwell计数实验进行分析.结果:原代细胞经过培养后贴壁生长,呈长梭形,生长状态良好,形态符合HTMCs形态学特征.HES1 shRNA有效下调HES1的mRNA和蛋白水平表达(P＜0.05).同时,HES1 shRNA组促纤维化ECM(FN;COL1;α-SMA)的mRNA和蛋白表达水平较Scramble组显著降低(P＜0.05).而Transwell计数实验显示HES1 shRNA组HTMCs的迁移数量较Scramble组增加(P＜0.05);CCK-8细胞活性分析实验表明抑制HES1表达对HTMCs的增殖活性影响不大,差异不具有统计学意义(P＞0.05).结论:成功建立了稳定表达HES1 shRNA的HTMCs细胞株.HES1可以影响HTMCs中促纤维ECM的生成及HTMCs的增殖和迁移能力.
作者：徐琳琪；齐艳；郭如如；汪建涛
来源：天津医科大学学报 2017 年 23卷 1期
