背景:细胞因子具有免疫佐剂效应,但将其用作幽门螺杆菌(H.pylori)核酸疫苗佐剂的研究报道尚少.目的:构建同时含H.pylori尿素酶B亚单位(ureB)基因和小鼠白细胞介素-2(IL-2)基因的重组活减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,体外鉴定其表达蛋白的免疫原性,体内检测其对H.pylori感染的免疫保护作用.方法:以聚合酶链反应(PCR)扩增H.pylori ureB基因和小鼠IL-2基因,分别插入pUCmT载体,测序,通过一系列酶切、连接反应分别克隆入真核表达载体pIRES,酶切、PCR鉴定;重组质粒pIRES-ureB和pIRES-ureB-IL-2分别转化减毒鼠伤寒沙门菌LB5000,抽提质粒,进一步转化终宿主菌SL7207,反复传代培养.以LipofectamineTM2000将重组质粒分别体外转染COS-7细胞,蛋白质印迹法检测表达蛋白的免疫原性.以疫苗菌经口接种小鼠,4周后予H.pylori攻击,攻击后4周鉴定H. pylori感染状况.结果:测序结果显示扩增出的ureB和IL-2基因序列与GenBank中的H.pylori ureB和小鼠IL-2序列一致,酶切、PCR鉴定证实ureB和IL-2基因已克隆入pIRES载体,并成功构建了稳定的含H.pylori ureB和小鼠IL-2基因的重组活减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗.蛋白质印迹法显示,pIRES-ureB-IL-2转染的COS-7细胞表达特异性UreB和IL-2蛋白.体内实验显示,疫苗接种组小鼠的免疫保护率显著高于PBS

作者：徐灿；李兆申；杜奕奇；屠振兴；龚燕芳；许国铭

来源：胃肠病学 2007 年 12卷 5期