[目的]非核糖体多肽合成酶(NRPS)在植物病原真菌与其寄主互作过程中发挥着重要作用,明确VmNRPS12基因在苹果树腐烂病菌致病过程中的功能,将为今后深入研究苹果树腐烂病菌NRPS作用机制提供理论依据.[方法]基于苹果树腐烂病菌全基因组数据,得到VmNRP S12基因.运用qRT-PCR技术分析VmNRPS12在侵染初期的表达水平,利用Double-joint PCR和PEG介导的原生质体转化获得该基因抗潮霉素的突变体,对突变体进行PCR检测及Southern blot验证得到敲除突变体,进一步通过重新导入该基因全长片段获得互补突变体,最后对野生型、敲除突变体和互补突变体进行菌落、产孢及致病力观察,对检测数据用SPSS软件进行差异显著性分析.[结果]定量分析显示该基因在侵染初期显著上调表达,且接种48 h后的表达量是对照的138.6倍.该基因的敲除突变体在营养生长及产孢方面与野生型菌株03-8相比无显著性差异,但致病力与野生型菌株03-8相比显著减弱,且互补突变体致病力近似恢复至野生型水平.[结论]Vm NRP S12基因与苹果树腐烂病菌致病性相关.
作者：马晨琛；李正鹏；戴青青；韩青梅；黄丽丽
来源：微生物学报 2016 年 56卷 8期
