[目的]菊糖芽孢乳杆菌(Sporolactobacillus inulinus)作为典型的同型发酵产D-乳酸的优势菌株,能够高效生产高纯度的D-乳酸.该菌株发酵受到多方面环境因素影响.糖代谢的关键酶例如葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶以及乳酸脱氢酶均为由葡萄糖代谢成为乳酸的关键酶,该菌中相关代谢酶的研究是发酵调控至关重要的基础.分析S.inulinus的基因组表明有3个推测为D-乳酸脱氢酶的基因,其中已有报道研究了1个双功能蛋白[bifunctional protein (BP)].本研究分别克隆并解析了另2个D-乳酸脱氢酶同工酶的性质.[方法]本研究以S.inulinus Y2-8基因组DNA为模板,克隆得到2个D-ldh基因(dldh、dhdh),经测序分别为D-乳酸脱氢酶[D-lactic acid dehydrogenase (DLDH)]和D-羟基酸脱氢酶[D-isomer specific 2-hydroxyacid dehydrogenase (DHDH)]的基因.构建的重组菌表达蛋白DLDH,DHDH均具有催化丙酮酸生成D-乳酸的功能.[结果]重组菌表达的蛋白经镍柱亲和层析达到电泳纯.SDS-PAGE分析表明DLDH的表观分子量为37 kDa,DHDH的表观分子量为39 kDa.此外,DLDH以丙酮酸为底物时Km值为(0.58士0.04)mmol/L,对底物有较高的亲和力,最适反应温度为35℃,最适pH为6.5;而DHDH以丙酮酸为底物时Km值为(1.70±0.08) mmol/L最适反应温度为30℃,最适p

作者：张淡如；郑璐；吴斌；何冰芳

来源：微生物学报 2016 年 56卷 11期