丙氨酸消旋酶是异构酶家族中一类重要的酶,既能作为新型抗菌药物筛选的靶标,又是酶法合成D-氨基酸的关键酶之一,有巨大的研究价值.[目的]为挖掘动物胃肠道中未培养微生物的丙氨酸消旋酶基因资源,探究不同微生物来源丙氨酸消旋酶基因及其酶的功能和性质.[方法]本研究从西黑冠长臂猿粪便微生物宏基因组出发,基于序列分析和基因功能注释,克隆丙氨酸消旋酶基因并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功异源表达,进行酶功能鉴定和性质研究.[结果]从宏基因组中获得2个丙氨酸消旋酶基因NCalr 1和NCalr 6并进行了重组表达,2基因全长均为1 170 bp,编码389个氨基酸;理论分子量分别为43.58 kDa和43.94 kDa.重组酶的最适pH均为12.0,最适温度为40℃和37℃.在pH 9.0-12.0条件下处理1 h,重组酶相对酶活性仍在90％以上,表明重组酶具有较好的耐碱性;在30-45℃处理1 h,相对酶活仍在85％以上,说明重组酶在30-45℃条件下稳定性好.重组酶的最适PLP浓度为10 μmol/L,添加10μmol/LPLP时,可使得重组酶的相对活性提高30％和7％左右;但当PLP的结合位点由赖氨酸突变为丙氨酸后,相对酶活仅为初始酶活的 1％和27％.两重组酶的Km分别为(14.81±1.66)mmol/L 和(25.87±1.95)mmol/L.10 mmol/L 的 Hg2+、Ag+、Zn2+和SDS对重组酶具有强烈的抑制作用;Fe3
作者：杨金茹；范琴；黄遵锡；韩楠玉；许波
来源：微生物学报 2022 年 62卷 4期
