[目的]β-葡萄糖苷酶,又称β-D-葡萄糖苷水解酶,属于纤维素酶类,是一种降解纤维素的关键限速酶.来源于嗜热古菌的β-葡萄糖苷酶已被广泛验证具有酸性高温等特性,已成为高温酶的研究热点之一.本文对尚未报道的来源于嗜热古菌中一种热丝菌(Thermofilum adornatum)的GH3家族的葡萄糖苷酶,进行了原核表达和酶学性质测定,以期找到更优的β-葡萄糖苷酶.[方法]从NCBI数据库中获得了嗜热古菌(T.adornatum)来源的GH3氨基酸序列,构建重组质粒pET-30a(+)-TaBgl3,并在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达重组蛋白;采用磁珠纯化,研究其酶学性质.[结果]重组蛋白TaBgl3的分子量为77.0kDa;酶学性质结果表明,其最适反应条件为80℃和pH 5.0,在70℃保温处理1-4 h,对TaBgl3的酶活力有促进作用,在最适温度80℃处理2 h后,其激活作用更加明显,能提高40％以上的酶活;其在pH 5.0-8.0下37℃保温1 h,仍具有60％以上的活性;底物为对硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)时酶的比活力为144.23 U/mg,米氏常数Km值和最大反应速率 Vmax分别为1.81 mmol/L和268.10 μmol/(mg·min),催化效率为115.47/s;终浓度为5 mmol/L的Cu2+、Li+和EDTA对TaBgl3的酶活有较大的促进作用,可提升39％以上的酶活,而5 mmol/L Fe3+和5％β-疏基

作者：沈风飞；缪婷婷；张晓晓；尹爱国；石鹏君；徐波

来源：微生物学报 2022 年 62卷 7期