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[目的]利用宏基因组学的方法从红树林土壤中筛选新型酯水解酶类.[方法]构建红树林土壤宏基因组文库,采用以三丁酸甘油酯为底物的功能筛选方法,对筛选出的阳性克隆进行系统发育树分析,实现新型磷脂酶A1基因的原核表达,研究重组酶的酶学性质.[结果]筛选到一个新的磷脂酶A1编码基因phop1 413 (GenBank登录号KF767097),测序表明其全长1 413 bp,可编码470个氨基酸残基,表达蛋白约51.7 kD,表达量高达220 mg/L,NCBI中BLAST比对及系统进化树分析显示该蛋白属于磷脂酶类的FAMILYⅥ家族;酶学性质分析表明,该重组酶的最适反应底物为对硝基苯酚己酸酯,比酶活为124 U/mg;最适反应温度为54℃,最适pH 7.8; 50℃热处理1.5 h剩余相对酶活为44％,表现出很好的热稳定性.[结论]通过构建宏基因组文库利用功能筛选方法获得一个新型磷脂酶A1基因;研究中获得的新型磷脂酶A1性质较好,可用于植物油酶法脱胶.
作者：冯娟；李荷
来源：微生物学通报 2015 年 42卷 3期
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