[目的]鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)是一种重要的禽病病原,分为21个血清型.但一直缺乏一种针对多种血清型广泛适用的抗体检测方法.前期的研究表明,外膜蛋白A (Outer membrane proteinA,OmpA)广泛存在于多种血清型的RA菌株中,是一种重要的免疫原性蛋白,并且其基因序列在RA血清型之间具有高度的保守性,提示其可以作为RA感染血清抗体检测的靶点分子.以重组蛋白OmpA建立间接酶联免疫吸附试验检测RA的抗体.[方法]通过诱导表达条件的摸索及蛋白纯化,获得适用于ELISA包被的重组OmpA抗原.通过Western-blot证明重组蛋白OmpA是否与RA多种血清型发生免疫学反应.进行方阵试验以确定ELISA抗原的最佳包被浓度、被检测血清的反应浓度.重复性、特异性和敏感性试验检查该方法的实用性.[结果]实验证实加入1％乙醇的诱导培养基有利于重组蛋白的可溶性表达.Western-blot结果表明,重组蛋白OmpA可以与1、2、6、10、11、13、14和17型多种RA主要流行血清型有良好的免疫反应性.经方阵试验确定抗原的最佳包被浓度为8 mg/L,待检血清的最佳稀释度为1∶160.所建立检测方法具有良好的重复性、特异性和敏感性.[结论]实验建立的鸭疫里氏杆菌多种血清型间接ELISA检测方法可以用于免疫后抗体消长以及感染性抗体的检测.
作者：季慕寅；王晴；翟志鹏；陈绵绵；马彩凤；姚火春；陆承平；张炜
来源：微生物学通报 2015 年 42卷 11期
