目的 构建含结核分枝杆菌(MTB)脂蛋白G(LprG)基因的真核表达载体pcDNA3.1-His-LprG-FLAG,并在HEK293T细胞中表达和纯化LprG融合蛋白.方法 以MTB H37Rv基因组DNA为模板,用PCR法扩增LprG基因,并通过DNA重组构建真核表达载体pcDNA3.1-His-LprG-FLAG,酶切鉴定并测序.将重组质粒转染HEK293T细胞后,应用Western blot法检测His-LprG-FLAG融合蛋白的表达.利用Ni-NTA金属亲和层析柱从细胞上清和细胞裂解液中纯化融合蛋白His-LprG-FLAG,并用SDS-PAGE和Western blot法检测纯化后的蛋白.结果 成功构建了pcDNA3.1-His-LprG-FLAG的真核表达载体,Western blot 结果表明转染质粒后,HEK293T细胞裂解液中检测到目的蛋白,相对分子量(Mr)为27 000.经Ni-NTA金属亲和层析柱纯化后得到高纯度的融合蛋白His-LprG-FLAG.结论 成功构建并在HEK293T细胞中表达和纯化了His-LprG-FLAG融合蛋白.
作者：白冰；苏敏；刘旻雁；李泰阶；李萌；梁宏洁；陈晋
来源：细胞与分子免疫学杂志 2015 年 31卷 12期
