目的 制备兔抗醛-酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)多克隆抗体,并鉴定其特异性.方法 应用逆转录PCR法扩增AKR1B10全基因,将扩增产物连接到原核表达载体pET-15b上,构建重组质粒pET-15b-AKR1B10,将其转化至大肠杆菌E.coli DH5α中.用异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,表达产物经SDS-PAGE分析鉴定出阳性者进行克隆,扩大培养,提取重组蛋白,用His-tag纯化柱纯化重组蛋白.将纯化的重组蛋白皮下注射到新西兰白兔,加强免疫得到抗血清.用AKR1B10重组蛋白制备抗体纯化柱,从抗血清中纯化出抗AKR1B10多克隆抗体,并进行SDS-PAGE、ELISA、Westem blot法鉴定.结果 成功构建了重组质粒pET-15b-AKR1B10,并获得高纯度的重组蛋白His-Tag-AKR1B10,制备的多克隆抗体相对特异性地识别AKR1B10.结论 兔抗AKR1B10多克隆抗体制备成功,特异性较好.
作者：胡建；王晴美；黄丽；曾元清；胡政；罗迪贤
来源：细胞与分子免疫学杂志 2016 年 32卷 11期
