目的 在大肠杆菌表达小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)蛋白并制备兔抗Setd8多克隆抗体.方法 将pGADT7-Setd8质粒和pET-30a载体分别双酶切后连接、转化和鉴定,构建pET-30a-Setd8原核表达质粒.将pET-30a-Setd8质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过镍亲和层析柱进行蛋白纯化.应用纯化的Setd8蛋白免疫新西兰大白兔,获得Setd8多克隆抗体.利用ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色法对所得多克隆抗体进行效价测定及特异性鉴定.结果 应用限制性内切酶双酶切后电泳及序列测定法,成功构建的pET-30a-Setd8重组质粒在大肠杆菌中IPTG诱导下能够高效表达重组Setd8蛋白.免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶1 000 000,Western blot法结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别细胞和组织中的Setd8蛋白,免疫组织化学染色法显示多克隆抗体识别的Setd8主要表达于成年小鼠睾丸组织中的精原细胞.结论 成功获得较高纯度Setd8蛋白,制备的Setd8多克隆抗体具有较高反应性和特异性.
作者：马海涛；郭佳倩；夏静；牛长敏；申雪沂；孙红亚；郑英
来源：细胞与分子免疫学杂志 2017 年 33卷 2期
