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目的 制备兔抗人视黄醇结合蛋白(RBP)多克隆抗体.方法 逆转录PCR扩增人RBP基因,将扩增产物连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-RBP,转化至大肠杆菌中.用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,表达产物经SDS-PAGE分析鉴定出阳性克隆,扩大培养.用组蛋白标签(His-tag)纯化柱纯化重组蛋白.将纯化的重组蛋白皮下注射到新西兰白兔,4次加强免疫得到抗血清.从抗血清中纯化出抗RBP多克隆抗体,并进行SDS-PAGE、ELISA和Western blot法鉴定.结果 成功构建了重组质粒pET-28a(+)-RBP,并获得高纯度的RBP重组蛋白,ELISA检测结果显示抗体效价达到1∶512 000.结论 成功制备兔抗人RBP多克隆抗体.
作者：廉芳；朱中元；裴华；陈运春；谢勇；张天蔚；卢姿；邱文华
来源：细胞与分子免疫学杂志 2019 年 35卷 7期
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