目的:建立成年豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞样细胞的原代培养方法,为进一步观察其电生理特性提供目标细胞.方法:实验于2005-04/08在第三军医大学第一附属医院中心实验室完成. ①细胞提取:取1～2个月龄成年豚鼠2只,雌雄不限.麻醉状态下处死,下腹部10g/L碘伏消毒后,即刻由腹部正中切口、于膀胱颈处取出膀胱,于解剖显微镜下仔细剔除膀胱外膜,纵行剖开膀胱、去除膀胱黏膜,将膀胱肌层置入含双抗的磷酸盐缓冲溶液中浸泡10 min.将上述处理的肌层组织剪成1 mm3小块,在含双抗的磷酸盐缓冲溶液中漂洗2次;换入10g/L胶原酶P溶液,盖紧瓶盖,置入37℃培养箱中消化30min,完全消化溶解后,移入离心管中离心. ②细胞培养:细胞沉淀中加入新鲜配制的达尔伯克(氏)改良培养基溶液(含体积分数为0.1的胎牛血清),吹打后按每瓶(容积25 mL)含(25～30)×104活细胞接种在培养瓶内,37℃,体积分数为0.05的CO2孵箱内静置培养;细胞接种第2天,可见胞体为梭形并有两个细胞突起的细胞贴壁,平滑肌细胞尚未贴壁.将未贴壁的平滑肌细胞转移至另一培养瓶,孵箱内静置3 d后,可见平滑肌细胞贴壁. ③培养细胞的观察与鉴定:采用相差显微镜观察和免疫细胞化学方法鉴定.结果: ①体外培养第2天可见胞体为梭形且胞体两极有两个细长突起的细胞贴壁,该类细胞酪氨酸蛋
作者：沈文浩；熊恩庆；李为兵；卢根生；宋波；金锡御
来源：中国临床康复 2006 年 10卷 1期
