目的:检测人类慢性粒细胞白血病中Borna病病毒的感染率情况,分析Borna病病毒与慢性粒细胞白血病是否存在相关性.方法:选取2004-01/2005-06重庆医科大学附属第一医院血液科收治的符合细胞形态学、免疫学及遗传学分型诊断标准的30例慢性粒细胞白血病确诊患者,另以30例健康自愿献血者作为正常对照.慢性粒细胞白血病患者和正常对照人群均取10 mL外周枸橼酸二钠抗凝血,采用Ficoll-conray液分离出外周血单个核细胞,提取RNA,随后采用紫外分光光度计测A260,A280值,计算RNA浓度.采用琼脂糖凝胶电泳进行RNA完整性检测,建立Borna病病毒P24阳性定量标准曲线,随机抽取一浓度质粒聚合酶链反应扩增产物进行克隆测序.采用荧光定量套式反转录聚合酶链反应检测RNA中Borna病病毒P24基因片段.结果:①5个梯度阳性模板定量扩增后均呈典型的S形,起始模板浓度与循环阈值相关系数达0.999 69,具有良好的线性关系.质粒PCR产物克隆测序结果与美国国立卫生研究院基因列数据库中调出Borna病病毒的第二开放阅读框(ORFⅡ)区P24序列一致,确定扩增成功.②4份样本电泳后可见28 s,18 s两条清晰的条带和稍欠清晰的5 s条带.A260/A280值分别为1.825,1.946,1.833,1.895,均在1.8以上.RNA浓度分别为0.584,0.872,0.416,0.524 mg/L.RNA的提取质量达到
作者：赵立波；谢鹏；牟君；杨泽松；李亚军；邹德智；刘庆军
来源：中国临床康复 2006 年 10卷 21期
