背景:研究发现miR-223-3p在骨质疏松患者体内高表达,但其相关机制研究甚少.目的:探讨hsa-miR-223-3p对骨髓间充质干细胞成骨分化的调节作用.方法:Percoll密度梯度离心法分离、培养骨髓间充质干细胞,诱导其成骨分化,然后过表达hsa-miR-223-3p,RT-qPCR和Western blot方法检测Wnt信号通路标志物Wnt5a及其下游信号分子OPG、RUNX2的mRNA和蛋白水平变化.构建pmirGLO/Wnt5a-3'UTR和pmirGLO/Wnt5a-3'UTR mut质粒,分别与hsa-miR-223-3p mimics/对照质粒共转染至293T细胞,双荧光素酶报告基因系统验证hsa-miR-223-3p与Wnt5a的靶定关系.结果与结论:①随着成骨诱导时间的延长,细胞培养液中碱性磷酸酶水平逐渐增加,茜素红染色可见暗红色或红褐色钙盐结节沉积逐渐增加;②过表达hsa-miR-223-3p后,细胞中Wnt5a、OPG、RUNX2的mRNA和蛋白水平降低;③hsa-miR-223-3p直接靶定Wnt5a的3'UTR区,降低Wnt5a的荧光素酶活性;突变掉Wnt5a的结合位点,靶定作用消失.封闭hsa-miR-223-3p后,野生型Wnt5a的荧光素酶活性增加,突变型Wnt5a的荧光素酶活性不变;④结果表明,在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中,过表达hsa-miR-223-3p可以影响Wnt信号通路标志物Wnt5a及其下游信号分子OPG、RUNX2的表达.hsa-miR-223-3p可直接与Wnt5a结合,Wnt5a作

作者：耿瑶；尹志良；李兴平；肖东琴；侯伟光

来源：中国组织工程研究 2021 年 25卷 7期