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目的:构建抗腮腺炎病毒抗体轻链基因重组表达载体.方法:从腮腺炎患者和腮腺炎抗体IgG阳性正常人群的淋巴细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA.用相应的引物进行PCR,扩增出轻链κ和λ基因,经Sac I和Xba I双酶切后,分别和噬粒载体pCornb3连接,再经电穿孔转化大肠杆菌XL1-blue菌株,将轻链基因克隆入载体pComb3.结果:从分离出的淋巴细胞中共提取高质量RNA约110μg,经逆转录、PCR,分别扩增出约700bp大小的κ和λ基因.PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接,在2.5kv,200Ω,25μF的条件下电转化,转化率为:4.14×107,随机挑取10个菌落进行PCR鉴定,共有6个克隆扩增出κ基因,1个克隆扩增出λ基因,轻链重组率为70
作者：俞慕华；陈昭斌；黄锐敏；段永翔；陈辉；叶友松；詹希美
来源：现代预防医学 2003 年 30卷 4期
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