目的 探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠胎肝干细胞(FLSCs)在体内及体外定向分化的潜能.方法 取孕13d绿色荧光蛋白(GFP)转基因C57BL/6J小鼠胚胎肝脏,经机械消化和胶原酶消化获得FLSCs并扩大培养;成熟肝细胞来自于同品系小鼠成体肝脏,通过两步灌注胶原酶消化法提取,流式细胞仪鉴定其干细胞标志物的表达及自我增殖能力,RT-PCR及Western blot测定AFP表达;分别将FLSCs经肝细胞生长因子(HGF)及TGF-3诱导分化后,Real-time PCR检测Alb、角蛋白CK-7、8、19 mRNA以及Western blot检测Alb、角蛋白CK-7、8、19蛋白在诱导前后的表达变化,鉴定其向肝细胞和胆管细胞双向分化的能力;经尾静脉注射FLSCs到野生型C57BL/6J肝切除小鼠体内,观察其在肝内重构肝组织的能力.计量资料采用t检验,各时相点比较采用重复测量的方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 成功克隆FLSCs细胞.流式细胞仪检测分离的FLSCs表达上皮细胞黏附分子(EpCAM)、CD133、CD49f干细胞标志物,其阳性表达率分别为78.6％±3.3％、31.7％±2.5％、47.6％±1.8％.AFP mRNA在FLSCs和成熟肝细胞中的相对表达量分别为0.640±0.115和0.053 ±0.012,蛋白相对表达量分别为1.383±0.265和0.243±0.227,两者比较,差异有统计学意义(t=8.772,5.354,P＜0.05).超低黏附培养皿培养F

作者：黄启科；党立力；阮柏；张卓超；刘杰；王兴；郑志刚；陶开山

来源：中华消化外科杂志 2014 年 13卷 5期