目的 研究晶状体主要内源性蛋白(major intrinsic protein,MIP) R233K突变体的产生是否影响MIP与钙调蛋白的相互作用,继而阐述此突变致先天性白内障的发病机制.方法 构建连有EGFP的MIP野生型及R233K突变体表达质粒,分别转染Hela细胞系,确定R233K突变体的亚细胞定位.用免疫共沉淀技术来检测R233K突变体与钙调蛋白的相互作用.合成野生型及突变型MIP羧基末端多肽链,用荧光素报告基因技术来验证这些多肽链的功能.结果 在EGFP的显影下,野生型及R233K突变体均定位于细胞膜上,p.R233K突变未影响MIP的亚细胞定位及其在细胞内的蛋白表达量.而免疫共沉淀实验显示,与野生型MIP相比,位于羧基末端的R233K突变体与钙调蛋白的相互作用明显减弱.荧光素报告基因实验证实,突变后的MIP与钙调蛋白的绑定亲和力明显下降.结论 R233K突变体影响了MIP与钙调蛋白的相互作用,降低了MIP羧基末端与钙调蛋白的绑定亲和力,继而影响了晶状体纤维细胞的水通透性,导致了先天性白内障的发生.
作者：胡姗姗；马笮；赵保文；林辉；齐艳华
来源：眼科新进展 2015 年 35卷 3期
