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目的探索多重PCR体系中各成分的最适组合,以便在真菌性角膜炎的诊断中获得准确、可靠的结果.方法对参与PCR基因扩增体系的成分在一定范围内设置不同的浓度或参数组,进行单因子或复因子检测,观测各因子在不同条件下对扩增结果的影响.结果多重PCR体系中各组分及退火温度等都会对反应产生一定的影响.优化后的反应体系体积为30μl:20×PCR Buffer 1.5μl,MgCl22 mmol/L,dNTP 200 μmol/L,引物各10 pmol,Taq DNA聚合酶2.0μl,DNA模板2μl;PCR反应参数:预变性94℃300 s,变性94℃60 s,退火55℃60 s,延伸72℃45 s,35个循环,终延伸300 s.结论多重PCR扩增体系通过对各种成分、因子的优化,可以达到特异性高且稳定可靠的目的.
作者：杨子建；王丽娅
来源：眼科研究 2006 年 24卷 3期
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