背景 人视网膜色素上皮(RPE)细胞移植治疗视网膜变性性疾病是目前的研究热点之一,许多生物载体可制备RPE细胞单层,但多存在着细胞毒性、稳定性差及免疫反应等问题. 目的 检测羊膜对人RPE细胞增生和分化的影响,探讨其作为人RPE细胞层载体进行移植的可能性. 方法 将RPE细胞系ARPE-19细胞株用含质量分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行培养和传代,8~12代细胞用于实验.将传代细胞分为2个组,一组细胞接种于去上皮羊膜作为实验组,另一组细胞直接在培养孔内进行培养作为对照组.分别于接种后24、48、72、96 h行MTT实验,测定RPE细胞的吸光度(A492)值以评估两组细胞在增生能力方面的不同;培养3周后的细胞层行苏木精-伊红染色,检测细胞在不同培养载体上是否存在形态学方面的区别;分别收集同一孔中生长于羊膜和培养板表面的细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测色素上皮衍生因子(PEDF)、钙黏蛋白(N-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)以及细胞连接相关蛋白的表达情况;同时收集培养3周时的细胞行透射电子显微镜和扫描电子显微镜检查,比较不同载体培养的ARPE-19细胞在超微结构方面的区别.结果 与对照组相比,实验组细胞增生的速度明显变缓,两组细胞增生情况比较差异有统计学意义(F=41.760,P=0.000).苏木精-
作者:王瑶;宫华青;杨玲玲;王茜;周庆军;王宜强
来源:中华实验眼科杂志 2012 年 30卷 9期