目的:探讨特异性AKT激活剂SC79对体外高糖诱导人视网膜色素上皮(ARPE)-19细胞凋亡的拮抗作用及其潜在机制。方法:将体外培养的ARPE-19细胞分别置于含5、10、20 μg/ml SC79的高糖(30 mmol/L葡萄糖)培养液中培养6、12、24 h，根据细胞增生率探索最佳的作用浓度和作用时间。将细胞分为4个组，其中正常对照组、甘露醇组和高糖组、分别于含5.6 mmol/L葡萄糖正常培养液、含5.6 mmol/L葡萄糖和24.4 mmol/L甘露醇培养液、高糖培养液中培养48 h，高糖+SC79组细胞于含10 μg/ml SC79正常培养液中培养12 h，然后于高糖培养液中继续培养36 h。采用MTS法检测细胞的增生率，采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，采用Western blot法检测磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、caspase-9、caspase-3及活化片段active-caspase-3的相对表达量。将细胞分为Neg-shRNA组、AKT shRNA组和空白对照组分别加入相应转染复合物和无血清培养基，采用实时荧光定量PCR检测各转染组Akt mRNA表达。将转染细胞分为Neg-shRNA+SC79组和AKT shRNA+SC79组，参照高糖+SC79组处理方式进行培养，采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果:不同浓度SC79处理不同时间细胞中以10 μg/ml SC79预处理12 h细胞的增生率最高。高糖组细胞增生
作者：郑磊；马大卉；陈妙虹；张国明
来源：中华实验眼科杂志 2023 年 41卷 3期
