目的 克隆珍稀濒危药用植物铁皮石斛Dendrobium officinale赤霉素3-氧化酶(gibberellin 3-oxidases,GA3ox)基因(DoGA3ox),并进行生物信息学和表达分析.方法 采用RACE和RT-PCR技术获得DoGA3ox基因cDNA全长;利用生物信息学软件预测其编码蛋白的理化性质、结构域及亚细胞定位等分子特性;用DNASTAR 7.0和MEGA 6.0软件分别对其进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测基因表达模式.结果 克隆到DoGA3ox基因(GenBank注册号KT597694),cDNA全长1 318 bp,编码一条由353个氨基酸组成的多肽,相对分子质量为39 052.5,等电点6.21;DoGA3ox蛋白不含跨膜域和信号肽,具有GA3ox的保守结构域DIOX N(40～130)和2OG-FeII_Oxy(197～299);DoGA3ox与大葱、油棕、海枣、野茶树及蓝猪耳GA3ox蛋白一致性分别为55％、56％、54％、51％、50％,与单子叶植物大葱、油棕和海枣的亲缘关系较近.qRT-PCR实验结果显示DoGA3ox基因在铁皮石斛种子共生(非共生)萌发1～3级时,其相对表达量呈现出先升高后降低再升高的趋势,分别为未萌发种子的13.44 (5.21)、7.28 (2.32)和9.40 (6.21)倍,由此可知,该基因在共生萌发种子中的表达量高于非共生萌发种子.结论 首次克隆得到1个DoGA3ox基因的全长cDNA,其转录本在共生和非共生

作者：刘思思；张岗；陈晓梅；李淑超；陈娟；郭顺星

来源：中草药 2016 年 47卷 6期