目的：观察单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)基因治疗系统对骨肉瘤细胞株OS732的杀伤作用并研究其作用机制。方法： 构建含HyTK基因的逆转录病毒载体DORHyTK，用DOTAP将其转入骨肉瘤细胞株OS732；提取阳性转染细胞(OS732TK)的DNA和总RNA，分别用PCR和斑点杂交的方法检测转染的效果；用MTT比色法测定OS732TK对GCV的敏感性及旁观者效应；Hoeschst 332258染色，电镜和流式细胞仪分析HSV-TK/GCV系统对OS732TK细胞杀伤作用的机制。结果：成功构建含HyTK基因的重组逆转录病毒载体DORHyTK。OS732TK细胞整合了TK基因并有稳定的转录产物。5 mg/L GCV作用5 d即可杀伤所有OS732TK细胞。旁观者效应在高、低两种细胞密度接种条件下均存在，且前者强于后者。Hoeschst 332258染色及电镜均显示典型的细胞凋亡特征，但也有少量坏死细胞的存在。流式细胞仪分析的结果说明在GCV作用下，OS732TK细胞阻滞于细胞周期的G0-G1期。 结论： HSV-TK/GCV基因治疗系统对骨肉瘤细胞株OS732有很强的杀伤作用，且存在明显旁观者效应。此系统导致了OS732细胞周期的紊乱，引起细胞的凋亡和坏死。HSV-TK/GCV基因治疗系统为骨肉瘤的治疗提供新的思路。
作者：乔慧；丘钜世；张惠忠；李扬；郑树森
来源：中国病理生理杂志 2001 年 17卷 3期
