目的:研究2次转基因对人胚胎干细胞(hESCs)多能分化特点和保持自我更新能力的影响.方法:构建携带非转录因子外源基因细胞毒性T细胞相关分子4免疫球蛋白 (CTLA4Ig) 、吲哚胺2,3双氧化酶(IDO)和荧光素酶的慢病毒载体,在hESCs先转导外源基因CTLA4Ig或IDO,完成筛选后转导外源基因荧光素酶.检测hESCs中外源基因的表达和功能,免疫组化和RT-PCR以及流式细胞仪方法检测hESCs细胞表面标记物、类胚体(EB)形成和体内畸胎瘤形成能力.结果:转导的外源基因均能表达并表现相应的功能.2次转导慢病毒载体后hESCs细胞表面标记物肿瘤排斥抗原(Tra-1-60) 和Octomer转录因子-4(OCT-4)染色仍为阳性,能形成EB,RT-PCR检测到甲胎蛋白(AFP)、配对盒基因6(Pax6)和MSI1的表达,异种移植后荧光信号逐渐增强.结论:利用慢病毒2次转导非转录因子外源基因不影响hESCs的未分化状态和多能分化能力,这对hESCs的转基因研究具有借鉴价值.
作者：蔡柳洪；周灿权；张滨；陶欣；林慧
来源：中国病理生理杂志 2009 年 25卷 11期
