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目的:探讨内毒素诱导大鼠肺泡巨噬细胞损伤时血红素加氧酶1(HO-1)对高尔基体应激的影响.方法:体外培养大鼠肺泡巨噬细胞,采用脂多糖(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞建立细胞损伤模型.使用CCK-8法检测细胞活力;使用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成;使用生物化学方法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;使用TUNEL染色和凋亡相关蛋白caspase-3/7活性检测试剂盒检测细胞凋亡;使用RT-qPCR和Western blot法检测HO-1和高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)的表达;使用Western blot法检测高尔基体结构相关蛋白GM130、golgin-97和mannosidaseⅡ的表达.使用小干扰RNA(siRNA)沉默HO-1后,重复以上检测.结果:LPS刺激肺泡巨噬细胞下调细胞活力、SOD活性及GM130、golgin-97和mannosidaseⅡ表达水平,上调ROS和MDA含量及HO-1和GOLPH3表达水平,并导致TUNEL标记阳性细胞数增多,caspase-3/7活性增强(P<0.05);HO-1基因沉默后,细胞活力、SOD活性及GM130、golgin-97和mannosidaseⅡ表达显著下降,ROS和MDA含量及GOLPH3表达显著上升,TUNEL标记阳性细胞数增多,caspase-3/-7活性显著增强(P<0.05).结论:内毒素诱导大鼠肺泡巨噬细胞损伤时,HO-1可减轻氧化应激和高尔基体应激反应,减少细胞凋亡.

作者:李玉婷;李香云;史佳;李翠;余剑波

来源:中国病理生理杂志 2022 年 38卷 3期

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作者:
李玉婷;李香云;史佳;李翠;余剑波
来源:
中国病理生理杂志 2022 年 38卷 3期
标签:
高尔基体应激;血红素加氧酶1;脂多糖;肺泡巨噬细胞;氧化应激
目的:探讨内毒素诱导大鼠肺泡巨噬细胞损伤时血红素加氧酶1(HO-1)对高尔基体应激的影响.方法:体外培养大鼠肺泡巨噬细胞,采用脂多糖(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞建立细胞损伤模型.使用CCK-8法检测细胞活力;使用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成;使用生物化学方法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;使用TUNEL染色和凋亡相关蛋白caspase-3/7活性检测试剂盒检测细胞凋亡;使用RT-qPCR和Western blot法检测HO-1和高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)的表达;使用Western blot法检测高尔基体结构相关蛋白GM130、golgin-97和mannosidaseⅡ的表达.使用小干扰RNA(siRNA)沉默HO-1后,重复以上检测.结果:LPS刺激肺泡巨噬细胞下调细胞活力、SOD活性及GM130、golgin-97和mannosidaseⅡ表达水平,上调ROS和MDA含量及HO-1和GOLPH3表达水平,并导致TUNEL标记阳性细胞数增多,caspase-3/7活性增强(P<0.05);HO-1基因沉默后,细胞活力、SOD活性及GM130、golgin-97和mannosidaseⅡ表达显著下降,ROS和MDA含量及GOLPH3表达显著上升,TUNEL标记阳性细胞数增多,caspase-3/-7活性显著增强(P<0.05).结论:内毒素诱导大鼠肺泡巨噬细胞损伤时,HO-1可减轻氧化应激和高尔基体应激反应,减少细胞凋亡.

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