目的 探讨miRNA-140-5p对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其可能的相关机制.方法 构建miRNA-140-5p模拟物(Mimic组)、抑制剂(Inhibitor组)、重组质粒pcDNA3.1-Wntl及其相应的阴性对照并转染hBMSCs,应用CCK-8、茜素红染色、Elisa、qRT-PCR、Western blot等多种分子生物学技术检测hBMSCs的细胞活力和成骨分化情况,应用双荧光素酶报告基因系统验证miRNA-140-5p的靶基因.结果 转染后,Mimic组miRNA-140-5p表达水平显著升高,Inhibitor组显著降低(P＜0.05),而hBMSCs的细胞活力在两组均无明显变化(P＞0.05).茜素红染色和成骨分化标志物Runt相关转录因子2(RUNX2)、碱性磷酸酶(ALP)蛋白检测结果显示Inhibitor组hBMSCs的成骨分化明显升高(P＜0.05),Mimic组hBMSCs的成骨分化受到抑制(P＜0.05).双荧光素酶报告基因系统结果显示,Wntl是miRNA-140-5p的靶基因.Western blot检测显示Wntl和β-联蛋白(β-catenin)的表达水平在Mimic组降低(P＜0.05),在Inhibitor组升高(P＜0.05).在hBMSCs中高表达Wntl后,其成骨分化明显升高(P＜0.05).结论 miRNA-140-5p的低表达可以通过靶向Wnt1/β-catenin信号通路促进hBMSCs的成骨分化.
作者：刘正标；徐华；周正宇；衣昕
来源：中国临床研究 2022 年 35卷 8期
