目的体外克隆表达C17orf77重组蛋白,制备其多克隆抗体,初步探索该蛋白的生物学作用,观察其细胞系分布特征.方法以HepG2细胞cDNA为模板,PCR扩增C17orf77目的基因片段,构建pET-32a(+)-C17orf77原核表达载体.转化大肠埃希菌,IPTG诱导C17orf77重组蛋白表达并进行Western blot鉴定.以重组蛋白免疫大耳白兔,获得兔抗C17orf77蛋白多克隆抗体,并分析其特异性及检测效价.MTT法观察不同浓度重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响.利用Western blot观察C17orf77蛋白在HepG2、L02、LX2和Jurkat细胞系的表达情况.结果PCR扩增获得C17orf77基因片段,成功诱导表达了C17orf77重组蛋白.制备了多克隆抗-C17orf77,ELISA检测抗体效价>1∶1280000.不同浓度C17orf77重组蛋白对HepG2细胞无明显增殖促进或抑制活性(P>0.05).C17orf77蛋白在HepG2、L02、LX2和Jurkat细胞系均有分布.结论利用体外克隆表达的C17orf77重组蛋白可制备效价和特异性均较高的多克隆抗体.HBV感染相关基因C17orf77在体外肝脏的间质和实质细胞,以及CD4+ T细胞系(Jurkat细胞)均有不同程度的表达.提示该基因可能与HBV感染的致病过程相关.
作者：孟雪；顾红岩；李辉；孙月；詹永婧；张仁雯；郝晓花；魏红山；李兴旺
来源：中国肝脏病杂志(电子版) 2013 年 1期
