目的 亚克隆金葡菌野生株S407030肠毒素B(SEB)基因,并在大肠埃希菌(E.coli)中表达,以获得重组SEB(Rseb)蛋白.方法 将含有SEB基因的质粒Pmd-18T/SEB双酶切获得目的片段,插入表达载体Pgex-4T-2中构建重组子Pgex-4T-2/SEB,并转化E.coli JM109感受态菌,阳性克隆以双酶切和PCR法鉴定;含重组质粒的工程菌以IPTG诱导表达Rseb蛋白;表达产物进行SDS-PAGE分析,并采用B-PER GST融合蛋白试剂盒纯化重组Rseb,Western blot鉴定其免疫反应性.结果 重组质粒经双酶切和PCR扩增鉴定均获得约705 bp的基因片段,与预期结果相一致;诱导表达的含GST的融合重组Rseb蛋白分子质量单位约为53 ku,纯化后作SDS-PAGE电泳显示一条蛋白带,Western blot显示Rseb能够被兔抗SEB抗体识别.结论 金葡菌野生株SEB在大肠埃希氏菌中得到有效表达,并获得电泳级纯度的重组Rseb,重组蛋白具有一定的免疫活性,为进一步研究其生物毒性与开发诊断试剂提供了生物材料.
作者：高世同；张仁利；刘会娟；秦莉；耿艺介；黄达娜；吴少庭
来源：中国病原生物学杂志 2007 年 2卷 6期
